PRÁCTICA NO. 6.
DETERMINACIÓN DEL TIEMPO DE REDUCCIÓN DEL AZUL DE METILENO EN LECHE DE VACA.
OBJETIVO
Que el alumno determine la presencia de microorganismos en leche de vaca, mediante el tiempo de reducción del azul de metileno.
SUSTENTO TEÓRICO
De acuerdo a la norma mexicana, NMX-F- 700-COFOCALEC-2004. (Sistema- producto leche-alimento-Lácteo- leche cruda de vaca- Especificaciones fisicoquímicas, sanitarias y métodos de prueba). La siguiente prueba se basa en que cuando se añade una pequeña cantidad de azul de metileno a la leche y la mezcla se incuba a 37ºC, se produce una decoloración debida al metabolismo bacteriano; la velocidad a la que se produce el cambio de color es directamente proporcional al número de gérmenes presentes. La mayor parte de los microorganismos cuando se multiplican son capaces de modificar el potencial de oxido de reducción (rH) de la leche lo suficiente como para transformar el azul de metileno en sus derivados incoloro, pero lo hacen de forma sensiblemente diferente según sus características. Algunas especies reducen el rH mucho más rápidamente que otras. Por lo tanto la prueba de reducción no se puede considera como una prueba exacta para valorar el número de bacterias realmente presentes pero en la práctica resulta de gran utilidad. Se utilizan con este fin colorantes como el azul de metileno o la resazurina, que se decoloran a una velocidad proporcional a la actividad de las reductasas microbianas. Existen otros factores que pueden afectar al tiempo de reducción, entre ellos, el tipo de microorganismo, el número de leucocitos, el periodo de exposición a la luz, la cantidad de oxígeno disuelto y la tendencia de la leche a elevar los microorganismos hacia la superficie a medida que se va separando la crema en el tubo de prueba. Es así como ciertos microorganismos (Lactococcus lactis ) son más activos en su capacidad reductora que otros, mientras que existen algunas especies que son muy poco activas en este sentido( Streptococcus agalactiae, Bacillus subtilis ,microorganismos termodúricos). Por otra parte, a medida que aumenta el número de leucocitos en la leche y su exposición a la luz natural o artificial, el tiempo de reducción tiende a reducirse, mientras que la agitación (al aumentar la cantidad de oxígeno disuelto) y la tendencia de la crema a ascender (arrastrando los microorganismos) son factores que tienden a retardar el tiempo de reducción. (Universidad de Zulia, 2003)En la leche la Reductasa generada por los microorganismos presentes y cuya actividad aumenta a medida que éstos aumentan, por lo que sirve para controlar el estado higiénico y de conservación de la leche y la aldehído-reductasa componente de la leche, cuya actividad se utiliza para controlar el tratamiento térmico (pasteurización, esterilización) a que se ha sometido la leche. (Biblioteca digital de la universidad de chile).
METODOLOGÍA
MATERIAL
•Solución de azul de metileno al 1%.
•Tubos de ensayo con torunda y capuchón estériles.
•1 vaso de pp.
•1 pipeta graduada de 10 ml estéril a 110 ºC.
•1 pipeta graduada de 5 ml. estéril a 110 ºC.
EQUIPO
•Estufa
PROCEDIMIENTO
1. En un tubo estéril se colocan 5 ml de leche se le añaden 10 gotas de azul de metileno, se tapa con una torunda de alcohol e invertir el tubo una o dos veces para mezclar la leche con el colorante.
2. Se incuba a 38º C en la estufa.
3. Se efectúan observaciones cada 15 minutos durante 7 horas, anotando el porcentaje de decoloración y el tiempo que tarda en ser decolorado al azul de metileno.
INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
Se pueden calcular aproximadamente los resultados de la prueba del azul del metileno de la siguiente forma:
Tiempo de decoloración
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Número estimado debacterias por mL
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Calidad de la leche
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5 horas
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100 000 a 200 000
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Buena
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2 a 4 horas
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200 000 a 2 000 000
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Buena a regular
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Menos de 2 horas
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2 a 10 millones
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Mala
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RESULTADOS:
Tiempo de decoloración:_________________________
DISCUSIÓN DE RESULTADOS:
CONCLUSIÓN:
FUENTES DE INFORMACIÓN
1.NMX-F- 700-COFOCALEC-2004. Sistema- producto leche-alimento-Lácteo- lechecruda de vaca- Especificaciones fisicoquímicas, sanitarias y métodos de prueba.
